1. 預(yù)期用途

NIBSC 06/202 人乳頭瘤病毒16 型標準品用于 HPV 16 型 (HPV16) DNA 的第一個國際標準基于核酸的測定由冷凍干燥的制備物組成含有全長 HPV16 DNA 的重組質(zhì)粒 pBR322 被克隆通過其獨特的 BamH1 站點 (Quint et al., 2006)。該標準已在純化的人類基因組 DNA 的背景下配制，凍干在 0.5 ml 等分試樣中并儲存在 -20 °C。材料經(jīng)過校準涉及 19 個實驗室的國際合作研究（Wilkinson 等人，2010）。國際標準包含的材料是專有的第三方，應(yīng)僅用于內(nèi)部校準或HPV-16擴增檢測的工作標準脫氧核糖核酸。國際標準不應(yīng)用于任何其他用途，使用后應(yīng)丟棄。

2. 注意
NIBSC 06/202 人乳頭瘤病毒16 型標準品不適用于人類食物鏈中的人類或動物。

該材料含有源自 C33A 細胞的 DNA。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應(yīng)被視為對健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實驗室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應(yīng)包括戴防護手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應(yīng)小心謹慎，以免割傷。

3. 單元

HPV16 DNA 的第一個國際標準（NIBSC 代碼 06/202）已規(guī)定為每安瓿 5 x 10^6 國際單位 (IU) 的單位。

可追溯性聲明：

在 2008 年 1 月的一次 WHO 會議上（WHO 會議報告，2008 年）提出，HPV16 DNA 國際標準的使用說明包括用于確定所用散裝材料的理論 HPV16 基因組當(dāng)量 (GEq) 的計算和假設(shè)在制定國際標準時，證明 1 IU 相當(dāng)于 1 GEq 用于 HPV16 DNA。因此，第一個 WHO HPV16 DNA 國際標準的最終統(tǒng)一仍然是 IU，而可追溯性聲明將允許用戶將 IU 等同于 GEq。

在新墨西哥大學(xué) (UNM) 的 Cosette Wheeler 博士的實驗室中進行了重組 HPV16 質(zhì)粒儲備制劑的 DNA 濃度測定。 DNA濃度通過260 nm處的吸光度以及使用Picogreen測定法（Invitrogen Corporation，USA）的分光熒光法測定。在兩次 DNA 測量之間獲得了 0.95 或更高的相關(guān)系數(shù)。將 10 ng HPV16 質(zhì)粒 DNA/μl 提供給 NIBSC 用于配制用于隨后冷凍干燥的散裝材料。 UNM 實驗室還向 NIBSC 提供了一份聲明，表明 HPV16 的 1.0 x 1011 GEq/ml 等于 1.17 ng/μl。因此，10 ng HPV-16 質(zhì)粒 DNA/μl 質(zhì)粒儲備液相當(dāng)于 8.547 x 1011 HPV-16 GEq/ml。 NIBSC 在制定第一國際標準時使用了這些數(shù)據(jù)

用于 HPV 16 型 DNA。

用于 HPV 16 型 DNA 的NIBSC 06/202 人乳頭瘤病毒16 型標準品的散裝材料配方：

在 NIBSC，根據(jù)公式制備大量 HPV16 質(zhì)粒 DNA 材料：

HPV GEq/ml 散裝材料 = (HPV GEq/ml 質(zhì)粒原液 x 體積質(zhì)粒原液)/體積散裝材料。

因此，HPV16 GEq/ml 散裝材料 = (8.547 x 1011 HPV-16 GEq/ml 質(zhì)粒原液）x（0.02223 ml HPV-16 質(zhì)粒原液）/1900 ml HPV-16 散裝材料 = 1.0 x 107 HPV-16 GEq/ml散裝材料 HPV-16 DNA 散裝材料隨后以 0.5 ml 等分試樣冷凍干燥。

第一次將 IU 等同于 GEq 需要某些假設(shè)HPV16 DNA 的國際標準：

1) HPV16 的 1.0 x 1011 GEq/ml 等于 1.17 ng/μl。

2) 凍干后 HPV16 DNA 的活性沒有損失。

3) 重組HPV-16質(zhì)粒DNA準確模擬了生物樣本中HPV16病毒DNA的活性。

獨立計算重組 HPV-16 質(zhì)粒的 GEq/ml脫氧核糖核酸。NIBSC 還使用 BioEdit 序列比對編輯器 v7.0.5.3 (Tom Hall, Isis 制藥公司，美國）。用于確定分子量的序列是用于 pBR322 的 GenBank 登錄號 J01749.1 和用于 HPV16 的參考序列（登錄號 K02718）。